对于方舟子的质疑,韩春雨在百度贴吧这么回应

来源:医谷整理 / 作者: / 2016-07-06
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近日,方舟子发文质疑《河北科技大学韩春雨“诺贝尔奖级”实验的重复性问题》,方舟子在文中表示,韩春雨在公开场合的言论与他在论文里的描述存在诸多矛盾,并称,“韩春雨在北大和遗传所的报告上都强调,他目前的NgAgo是初级版、需要高超的实验技巧”,而方舟子认为韩春雨描述的只是并不复杂的转染实验,是现成的技术,并不需要高超的实验技巧,按照其提供的步骤应该是不难被重复出来的才对,而不应该出现“没法重复该实验”的情况。

对于方舟子的质疑,72日,韩春雨在百度贴吧“国际米兰吧”发帖做出了回应。

一位名为“第十三米的阳光”的吧友引用方舟子质疑文章中的内容在该贴吧内发帖。

 



随后,韩春雨用自己的“槐北路”的账号进行了回复。

 

很多网友对韩春雨表示了支持。

 

韩春雨在回复中,对于方舟子的质疑一一详细作答。

方舟子质疑1.图片3:有人能重复(FACSWestern Blot),但那有可能是假阳性。

韩春雨回复:高超的技巧,其实也很简单,细胞做好检测,不要有寄生菌污染,不要有支原体污染(Ago系统对污染特别敏感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下,单转guid不会影响GFP表达,假阴性也大多因为细胞污染,假阳性和假阴性我都遇到过,国内买的细胞我就不吐槽了),转染用的质粒质量要好(可用30ngGFP转细胞,若是均一且效率高表明质量好,强弱不均一则表明质量差,越不均一表明质量越差),guide磷酸化完全(没有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果,至于怎么检测,自己跑个PAGE看看---)。

方舟子质疑2目前还未见有人反映重复出了图4结果,据称韩春雨在遗传所的报告上说,重复出来和不能重复的比例是1:3,能重复出来的有20家。那么究竟有哪家实验室重复出来了?(指图4结果)这事没必要保密吧。

韩春雨回复:特别的,对于Fig4,也是几乎惟一算是有难度的,就是控制转染时的细胞密度和用血清控制细胞生长,时间稍长,毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着online methodprotocol for genome editing and T7E1做(小经验,PCR最好不要有引物二聚体,如果引物二聚体多请重设引物;PCR产物直接回收最好不跑胶回收,可能跟ago24bp有关,设好对照!)---银染分辨率高,可以排除T7E1假阳性,能做出预期条带后请用PCR产物去测序--------欢迎大家广泛使用此系统,并分享成功经验和失败教训。附,addgen上的质粒,可以直接用作基因组编辑。再次强调,不加NgAgo,就能抑制GFP,是假阳性,是细胞出问题了(谢天谢地不但我自己而且审稿人也有这个对照)出现假阳性的细胞切基因组就没戏了。对于Fig4,若是不习惯做银染,也可以直接做KIdoner GFPcoden+polyA signal,前后加几个保护性的碱基---GFP-N1扩出来连到T-vector上,再从此doner-Tvector上扩(防止GFP-N1污染的假阳性)出来纯化,500-800ng共转(for each well of 24 well plate)。

同时,韩春雨针对知乎上的一些质疑,也做出了回复,并无奈表示“我这么苦口婆心的……”


而对于韩春雨的回应,方舟子自然不甘示弱,在微博做出了表态。

 


 

 

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换一换

这题目取得,直接说让人类灭亡得了

是不是要多吃酸奶,使肠道菌群合理

中国是个14亿人口的大国,也是患癌大国,然而投入治癌药的科研确少的可怜,希望国家多点资金鼓励正在研发抗癌药的科学家,少买美债。

Palermo这个人害惨世界上很多人

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