科学家建人造精子介导高效产生点突变 新方法

来源:科学网 / 作者:黄辛 / 2017-08-26
0 3 311

中科院生化与细胞所李劲松研究组和第二军医大学附属长征医院袁文课题组在一项最新的研究中,结合 CRISPR-Cas9 基因编辑技术和半克隆技术,实现了点突变小鼠的高效制备。相关研究成果日前在线发表于国际学术期刊《遗传学报》。

建立点突变小鼠模型,尤其是致病基因点突变的小鼠模型,对研究基因的功能和疾病的致病机制至关重要,但是通过传统的同源重组编辑胚胎干细胞的方法耗时耗力。近年来,通过 CRISPR-Cas9 直接注射受精卵可以获得到携带点突变的小鼠,但产生携带点突变小鼠的效率不高且存在个体基因型嵌合的现象。李劲松研究组的前期研究建立了小鼠孤雄单倍体胚胎干细胞(AG-haESCs)及将其注入卵子获得健康小鼠的半克隆技术,进一步优化该技术获得了能稳定高效产生半克隆小鼠的单倍体干细胞(又称为“人造精子”),为快速制备携带目的点突变小鼠模型提供了新方法。研究人员首先采用携带点突变的单链寡脱氧核苷酸(ssODN,长度为 99 碱基)作为修复模板与 CRISPR-Cas9 共同转入单倍体细胞中,发现随着目的突变位点与 Cas9 酶切割位点(即 DNA 双链断开位点)距离的增加,同源重组获得携带突变位点细胞的效率急剧下降。当距离≥10bp 时,采用 ssODN 为模板的效率低至无法检测,无法获得携带这些位点的突变细胞。为此,项目组构建了携带点突变的双链载体作为模板(长度为 258bp-2.1kb),发现可以显著提高同源重组效率;同时,发现当载体长度在 1 -1.5kb 时,同源重组效率最高。研究人员进而建立了携带点突变的单倍体细胞系,并通过卵子注射高效获得携带目的点突变的小鼠模型。研究人员提出在致病点突变的模拟过程中,当突变位点与 DNA 双链断开位点距离<10bp 时,可以选用 ssODN 为模板;当突变位点与 DNA 双链断开位点距离≥10bp 时,采用载体作为模板时会有较高的效率。

据悉,魏磊鑫和王修坤为本文共同第一作者。

关注微信公众号(bio360),定时推送,福利互动精彩多
6

参与评论

登录后参与评论

评论

换一换

广东省的护士可以吗?

这是真的吗?什么时候上市

希望对腺泡状肉瘤有效

期待加等待。

 关注生物360微信

关注生物360微信